人脈絡膜血管細胞提取物說明書

人脈絡膜血管細胞提取物【Human Eyes: Normal Choroidal Vascular Cells Derivatives】
  人脈絡膜血管細胞提取物說明書人脈絡膜血管細胞提取物是從人原代脈絡膜血管細胞提取的，人原代脈絡膜血管細胞從正常人脈絡膜血管組織制備。正常人脈絡膜血管組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。        cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA*鏈，以50ul總反應體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及0mg總RNA。68℃反應0min 后終止RT反應。利用x RT Buffer 運輸cDNA， μl cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。        蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 50mM NaCl, mM EDTA, mM EGTA, % NP-40 , mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人血管組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, % SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。        潛在的應用： <>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學；<6>芯片研究與表達圖譜

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注意事項：
. 接收到人脈絡膜血管細胞提取物說明書，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞00X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA-.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

培養(yǎng)步驟：
人脈絡膜血管細胞提取物說明書對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按：2到：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。?

IRAK4 抗體, 兔多抗 ELISA    400 µg

I-TAC / CXCL 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA    50 µg

MEK2 / MAP2K2 / MKK2 抗體, 兔多抗 ELISA    400 µg

IGSF3 抗體, 鼠單抗 FCM    50 µg

NME / NDKA 抗體 (FITC), 鼠單抗 FCM    25 Test

SULT2A / STD 抗體, 鼠單抗 ELISA   WB    50 µg

Transferrin Receptor / TFRC / CD7 抗體 (PerCP), 兔單抗 FCM    25 Test

NGF / NGFB 抗體, 鼠單抗 ELISA    50 µL

ACO2 / Aconitase 2 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA   WB  IHC-P   IP    50 µg

CD66 / ALCAM 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA    50 µg

人脈絡膜血管細胞提取物說明書聚酰胺60-00目 500g  瓶

Vitexin-2”-o-rhamnoside 牡荊素鼠李糖苷 64820-99-  20mg

75cm2正方斜口濾膜培養(yǎng)瓶 5個  包

Celestine blue B 天青石藍 g  瓶

Uniconazole 烯效唑 25g  瓶

SodiuM iodide  25g  瓶

Metronidazole 443-48-  00mg

Levonorgestrel 左 797-63-7  00mg

EDTA脫鈣液（pH7.2） 00ml  瓶

Di-tert-octyl-Disulfide 化天竺葵素 29956-99-8  0mg

液相RNase清除劑 .5ml  支