Elisa試劑盒的操作因固相載體的形成不同而有所差異，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結果準確可靠的必要條件。國內(nèi)醫(yī)學檢驗一般均用板式點。
 

　　Elisa試劑盒的操作步驟：
 

　　方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
 

　　. 包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為～0μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.ml，4℃過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡稱洗滌，下同)。
 

　　2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.ml于上述已包被之反應孔中，置37℃孵育小時。然后洗滌。(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。
 

　　3. 加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.ml。37℃孵育0.5～小時，洗滌。
 

　　4. 加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.ml，37℃0～30分鐘。
 

　　5. 終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
 

　　6. 結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：小鼠ELISA試劑盒反應孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或較淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測O·D值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則40nm)處，以空白對照孔調零后測各孔O·D值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.倍，即為陽性。
 

　　方法二 用于檢測未知抗體的間接法：
 

　　用包被緩沖液將已知抗原稀釋至～0μg/ml，每孔加0.ml，4℃過夜。次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標二抗體(抗抗體)0.ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。
 

　　洗滌：
 

　　洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應步驟，ELISA試劑盒但卻也決定著實驗的成敗。ELSIA就是靠洗滌來達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質，以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的，而在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來?？梢哉f在ELISA操作中，洗滌是zui主要的關鍵技術，應引起操作者的高度重視，操作者應嚴格按要求洗滌，不得馬虎。