在實驗過程中往往會有不盡人意的地方，比如說人ELISA試劑盒實驗背景過高，那么造成ELISA實驗背景過高的主要原因有哪些呢？下面是講一些詳述：
、不正確的洗滌
洗滌不充分或省略洗滌步驟中的任何一步均會導致背景色過高。
解決方法：檢查洗滌緩沖液的體積并確保完成所有的洗滌步驟；確保洗滌緩沖液的正確稀釋和正確使用。
2、底物污染
ELISA試劑盒確保在使用前，底物不被金屬離子或氧化劑污染；在實驗時留存一些額外的底物，底物本身不應該有顏色。
3、底物曝光
底物曝光會使底物變成藍色，因此在加入板內之前要保存在暗處(即試劑瓶內)。
4、HRP的錯誤稀釋
HRP濃度過高會造成高背景色，因此要嚴格按照產品說明書稀釋。
5、錯誤的孵育時間和溫度
必須嚴格按照產品說明書來定孵育時間和溫度。
6、包被板保存不當
ELISA試劑盒如果包被板只用了一部分，一定要正確保存剩余的板條。